直扩PCR(Direct PCR)是一种无需核酸提取步骤、可直接对原始生物样本(如血痕、血卡、唾液斑及现场混合检材)进行扩增的技术。该技术通过简化操作、提升效率并降低成本,正推动法医检测进入免提取的精准时代,显著缩短鉴定时间,同时减少样本损耗与污染风险。2024年,美国国家司法研究所的报告明确将直接PCR视为提升现场“痕量DNA”证据分析速度、简化流程的关键技术。

图示.直扩PCR流程[1]
该技术的核心在于采用了经深度优化的高耐受性DNA聚合酶和专用缓冲体系,能够有效克服血红素、环境降解产物及各类常见PCR抑制剂的干扰,从而在复杂的现场生物检材中仍能保证扩增的稳定性与可靠性。
近岸蛋白HotStart Taq DNA Polymerase III (Glycerol-Free)(Cat. No.: E285-03) ,一款专为多重PCR 和高要求扩增场景设计的无甘油热启动Taq酶。
产品应用
基因组分型、司法鉴定、高通量遗传鉴定分析、多重病原体检测等。
产品特点
强耐受性
对血红素、腐殖酸等常见PCR抑制剂表现强耐受性(抗腐殖酸可达70 ng/T,抗血红素可达12 μM),确保在复杂样本中依然可以稳定扩增。

强稳定性-37℃加速
37℃放置7天能稳定检出低至4 pg的cDNA模板;

37℃放置9天,酶量低至0.625 U时,可稳定检出含有25%猪血背景的4 ng cDNA模板;

37℃放置9天,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

强稳定性-反复冻融
经过25次冻融,试剂仍能稳定检测到低至400 fg的微量cDNA模板;

经过25次冻融后,低至0.625 U的酶量可稳定检出含有25%猪血背景的4 ng cDNA模板;

经过25次冻融后,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

强稳定性-模拟运输
试剂模拟运输96 h后,37℃放置7天能稳定检出到低至4 pg的cDNA模板;

试剂模拟运输96h后,37℃放置7天,酶量低至0.625U能稳定检出含有25%猪血背景的4ng cDNA模板;

试剂模拟运输96h后,37℃放置7天,酶量低至0.164 U时,体系仍能有效扩增,并可通过琼脂糖凝胶电泳检测到预期条带。

更快的热启动
预变性时间可缩短至95℃ 30s,与2min效果无显著差异,进一步缩短热启动时间。

客户实测
本次实验在优化条件下,比较了两种扩增酶对磁珠提取的血液DNA样本进行30重STR分型的检测性能。毛细管电泳(CE)结果显示,两者在200–500 bp 范围内均呈现出清晰、分离度良好的峰,无明显杂峰或引物二聚体,表明扩增效率相当且特异性高。

同样,在Chelex粗处理DNA的扩增性能表明两种扩增酶也表现出较高的一致性。

⭐产品信息
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参考文献
[1] U.S. Deppartment of Justice (NIJ). Improving Analysis of “ Trace DNA” Evidence.
